HP006 阪崎克罗诺菌测试片

样品制备

预增菌：无菌操作称取 100g(mL)样品，置于预热至 44℃盛有 900mL 缓冲蛋白胨水 （BPW）的无菌均质袋内，用均质器均质 1～2min。若样品为液态，振荡混匀。 必要时用无菌 1 mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 溶液调节样品匀液 pH 至 6.8±0.2。 于 36℃±1℃培养 18h±2h。

增菌：轻摇培养过的样品混合物，取 1mL 转种 10mL mLST-Vm 肉汤内，于 44℃±0.5℃培养 24h±2h。

接种

将克罗诺阪崎肠杆菌测试片置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管 吸取 1 mL 无菌水或无菌生理盐水滴加到测试片中央，缓缓盖上上层膜避免产 生气泡。静置 0.5～1h 使样液扩散并重新形成凝胶。揭开上层膜，用 1μL 接种 环刮取 1 环增菌液在凝胶上划线分离。

或用 1mL 无菌吸管或移液器吸取增菌液 1 mL，注入含有 9 mL 无菌生理盐水或磷酸盐缓冲稀释液的试管内，振摇后成为 1:10 的样品匀液，以此类推， 制备 10 倍系列稀释的样品匀液，每次换一支吸管。根据对样品污染状况的估 计，选择 2～3 个稀释度进行检测(可以是增菌后的原液)。将测试片置于平坦实 验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取 1 mL 样品匀液滴加到测试片中央，缓缓盖上上层膜，避免产生气泡。静置 3～5 min 使样液扩散并重新形成凝胶。

培养

将测试片正面向上水平放置 44℃±0.5℃，培养 18h～24h。

判读

养区域呈蓝绿色，可能是菌浓度过高，需对样品进一步稀释以获得确切的计 数。如需分离菌落进行进一步分析，揭开上层膜用接种针将菌落挑出使用即可。