植物DNA快速纯化试剂盒

植物DNA快速纯化试剂盒的使用方法

1，用液氮把植物/真菌样品研磨成粉末，转移50~100mg新鲜/冻藏样品或15~40mg干燥样品至1.5mL离心管中；
2，立即吸取预热至65℃的BufferPLB700μL至研磨后的样品中，剧烈涡旋使样品充分分散，65°C水浴15分钟，期间手动颠倒混匀3次；注：处理复杂样品，如容易氧化褐变的样本，加入β-巯基乙醇(自配)至BufferPLB中，终浓度为0.1%(V/V)，极难提样品可加至2%(V/V)，以提高裂解液的抗氧化能力。
3，加入700µL氯仿至样品中，涡旋混匀10秒；注：处理富含多酚或淀粉的植物/真菌组织，可在第3步前，用酚:氯仿=1:1进行等体积抽提。
4，室温下，12,000×g离心5分钟，小心转移上清液至新离心管中；注：若需彻底去除RNA，加入10μLRNaseA至上清液中，颠倒混匀，室温放置5~10分钟。
5，加入700µLBufferPBB至上清中，颠倒混匀15次；
6，把DNA柱装在收集管中，转移一半体积混合液至柱子中，12,000×g离心1分钟。
7，倒弃滤液把柱子装回收集管，把剩余混合液转移至柱子中，12,000×g离心1分钟。
8，倒弃滤液把柱子装回收集管，加入500µLBufferPW1至柱子，12,000×g离心1分钟。
9，倒弃滤液把柱子装回收集管，加入700µLBuffePW2至柱子中，静置1分钟后12,000×g离心1分钟。
10，倒弃滤液把柱子装回收集管，加入700µLBufferPW2至柱子中，静置1分钟后12,000×g离心1分钟。
11，倒弃滤液把柱子装回收集管，12,000×g离心2分钟去除柱子中残留的乙醇。
12，将柱子转移至新的1.5mL离心管中，加入50~100µL预热到65°CElutionbuffer至柱子的膜中央。室温静置4分钟，12,000×g离心1分钟。丢弃DNA结合柱，把得到的DNA溶液保存于-20℃。Elutionbuffer可用无菌去离子水替代，但pH值应在8.0~8.5。将Elutionbuffer预热到65℃使用，可提高基因组DNA得率。可将洗脱得到的溶液再次吸出滴加吸附柱中央，静置几分钟后再次离心收集可提高基因组DNA提取得率。

植物DNA快速纯化试剂盒的使用注意事项

1.本试剂盒提取使用的器皿、移液器等均应为专用，离心管、枪头等一次性耗材需进行高压灭菌。操作人员应穿戴洁净工作服、口罩、帽子、使用一次性无粉手套。
2.尽量使用新鲜样品，以降低基因组DNA的降解风险。
3.加入PLB前应预热到65℃，以免影响提取效果。
4.裂解液注意不要直接接触皮肤，如有接触请用大量清水冲洗。
5.漂洗液使用后盖紧盖子，以免乙醇挥发影响抽提效果。
6.如果基因组DNA需长期保存，建议使用Elutionbuffer洗脱，分装保存于-20℃或-80℃。
7.请严格按照本说明书操作步骤进行，不同批号的试剂若无特殊说明，请勿混合使用，并保证在有效期内使用该试剂盒，因操作不当导致的基因组DNA提取效果不佳，本公司概不负责。
8.妥善处理所有样本和试剂材料，彻底清洁和消毒操作台面。

植物DNA快速纯化试剂盒的储存条件及有效期

室温保存，有效期1年，若长时间不使用可放置2~8℃保存（储存过程中若溶液产生沉淀，使用前将其在室温放置一段时间或65℃条件下温育，待充分溶解后摇匀即可使用）。