Top10CompetentCell

Top10CompetentCell的产品特点

适用于高效的DNA克隆和质粒扩增。
φ80,lacZΔM15基因的产物可与pUC载体编码的β-半乳糖苷酶氨基端实现α互补，可用于蓝白斑筛选。

Top10CompetentCell的操作方法

1）取感受态细胞置于冰浴中，一次转化感受态细胞的用量为50-100μl，可根据实际情况分装使用。所用DNA的体积不要超过感受态细胞的十分之一，以下实验以100μl感受态细胞为例。
2）待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液枪吹打混合，冰上放置30分钟。
3）将离心管置于42℃水浴中，热击60-90秒，迅速将离心管置于冰上，放置2-3分钟。
4）向每个离心管中加入500μl无菌不含抗生素的LB或SOC培养基中，37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟，使质粒上相关抗性基因表达，菌体复苏。
5）吸取200μl已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的LB或SOC固体平板上，用无菌涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃培养箱里直至液体完全吸收，倒置培养12-16小时。涂布量应根据具体实验调整，如果转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板，如果预计的克隆数较少，可3000rpm离心5分钟，吸取部分培养基，悬浮菌体后涂布在一个平板上。涂布剩余的菌液在置于4℃冰箱中保存，如果第二日转化菌落数过少，可以将剩余菌液再涂布在新的平板上。

Top10CompetentCell的注意事项

1）感受态细胞应保存于-70℃冰箱中，不可反复冻融，或放置时间过长，避免感受态转化效率降低。
2）实验操作时，应注意无菌条件。
3）实验过程中，可保留部分连接反应液，当转化不成功时，可重新转化。