pSecExpressionKit

pSec专为目标蛋白在大肠杆菌中高效分泌表达设计，是预先用XhoI线性化的载体，可配合PlusPCR产物一步无缝克隆试剂盒（Cat.No：HKNR005）使用。外源蛋白在大肠杆菌中表达容易形成包涵体，使获得有生物学活性的蛋白增加困难。同时大肠杆菌细胞内为还原环境，目标蛋白二硫键无法形成。周质分泌是获得正确折叠的目标蛋白质的有效途径，常见表达载体往往由于蛋白表达过快，目标蛋白来不及正确折叠和分泌而形成包涵体。该质粒适用于阿拉伯糖诱导，有较强的剂量依赖性。合适的阿拉伯糖浓度能够在保障表达效率的同时获得有效的蛋白质分泌。目的基因扩增按常规方法设计引物后，在上游引物5´端引物前添加以下序列：CCGGCGATGGCCATG；下游引物5´端引物前添加：CGCGGCCGCAAGCTT。注意：5´端引物从第一个氨基酸不是甲硫氨酸（ATG）时，可使用CAGCCGGCGATGGCC。不希望目标蛋白C端保留HisTag时，3´端引物需要加入终止密码子。