SimpleCloningT-vector是一种PCR产物高效TA克隆的专用T载体,它由pUC18载体改造而成,去除了PCR产物插入区域两侧所有的酶切位点。PCR产物克隆后如果使用其两端的酶切位点进行酶切时,T载体上不会有相同的酶切位点影响酶切反应,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。多克隆位点的消除并不影响β-半乳糖苷酶的正常表达,PCR产物克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白斑筛选,挑选阳性克隆。传统T载体在进行连接时的操作程序是:载体、片段、T4DNALigaseBuffer、T4DNALigase。本制品是在传统模式上将除了插入片段的各成分进行预混,并使其在稳定性、转化子数目、阳性率方面不低于传统模式,使用时只需加入插入片段即可,大大简化了操作过程,降低了配制连接体系过程中的误差和污染率,节省了时间。
规格 - HKT004-01A2×pSC-TvectorFastLigationMix
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKT004-01A | 2×pSC-T vector Fast Ligation Mix | 20次 | T载体 | 540 |
HKT004-01A2×pSC-TvectorFastLigationMix的操作方法
1)取10μL加入至100μL感受态细胞中,用移液枪吹打混合,冰上放置30分钟。
2)将离心管置于42℃水浴中,热击60-90秒,迅速将离心管置于冰上,放置2-3分钟。
3)向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB或SOC培养基中,37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟,使质粒上氨苄抗性基因表达,菌体复苏。
4)吸取200μL已转化的感受态细胞,加到含氨苄青霉素的LB或SOC固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置培养12-16小时。
5)PCR检测,利用试剂盒自带的高速PCR扩增试剂2×FastTaqMastMix直接进行菌落PCR鉴定。
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