SimpleCloningT-vector(pSC-T)是一种PCR产物高效TA克隆的专用T载体,本载体消除了PCR产物插入区域两侧的多克隆位点。在PCR克隆构建过程中,为了进一步的克隆步骤,常会在PCR产物的两端引入专门的酶切位点,如T载体上已带有相同的酶切位点,会对下一步的酶切连接带来不利的影响。为消除多克隆酶切位点带来的负作用,SimpleCloningT-Vector去除了PCR产物插入区域两侧所有的酶切位点。带有酶切位点的PCR产物克隆后进行酶切时,T载体上不会有相同的酶切位点影响酶切反应,可以大大提高酶切效率,增加亚克隆成功率。多克隆位点的消除并不影响β-半乳糖苷酶的正常表达,PCR产物克隆后仍可以利用α-互补性进行蓝白斑筛选,挑选阳性克隆。由于本载体上消除了多克隆酶切位点,在PCR扩增引物设计时需要考虑导入合适的酶切位点。
规格 - HKT001-01ASimpleCloningT-vector(pSC-T)
编号 | 产品名称 | 规格 | 产品介绍 | 价格 |
HKT001-01A | Simple Cloning T-vector(pSC-T) | 20次 | T载体 | 540 |
HKT001-01ASimpleCloningT-vector(pSC-T)的操作方法
1)选择合适的连接体系(详细介绍见背面)。
2)取10μL加入至100μL感受态细胞中,用移液枪吹打混合,冰上放置30分钟。
3)将离心管置于42℃水浴中,热击60-90秒,迅速将离心管置于冰上,放置2-3分钟。
4)向每个离心管中加入500μL无菌不含抗生素的LB或SOC培养基中,37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟,使质粒上氨苄抗性基因表达,菌体复苏。
5)吸取200μL已转化的感受态细胞,加到含氨苄青霉素的LB或SOC固体平板上,用无菌涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃培养箱里直至液体完全吸收,倒置培养12-16小时。
6)PCR检测,利用试剂盒自带的高速PCR扩增试剂2×FastTaqMastMix直接进行菌落PCR鉴定。
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